Het Luther Museum Amsterdam is gevestigd in gebouw Wittenberg aan de Nieuwe Keizersgracht. Het pand uit 1772 is gebouwd als het Evangelisch-Luthers Diaconie Oude Mannen- en Vrouwenhuis. Het speelde een grote rol bij de opvang van armen, ouderen en wezen.
De rondgang door het museum begint in de Herenregentenkamer, ooit ontworpen door Jacob Otten Husley. Vanuit deze kamer bestuurden de regenten het diaconale zorghuis. Dan volgt de Administratiekamer. In deze kamer wordt verteld over Maarten Luther en het Woord aan de hand van schilderijen en de vele oude bijbels die het museum bezit. De kamer ernaast is de Linnenkamer, verbonden met de Damesregentenkamer. Linnen was één van de kostbaarste bezittingen van het huis. Waar ooit het linnengoed veilig lag opgeborgen, staat nu avondmaalszilver te pronken, niet alleen uit Amsterdam, maar ook uit andere Lutherse gemeentes zoals Doesburg, Zierikzee en Leiden. De oudste stukken komen uit het begin van de zeventiende eeuw. In de Damesregentenkamer wordt verteld over de belangrijke rol die vrouwen speelden binnen het huis en de kerk.
Een lange gang deelt de geschiedenis en de huidige werken van de Diaconie, de zorg voor armen, ouderen, mensen zonder papieren en leden van de LGBTQ+ gemeenschap.
In de Kerkzaal vinden regelmatig tentoonstellingen, evenementen en concerten plaats. Ook wordt de imposante orgel in deze zaal vaak bespeeld.